做好以下五點就可(kě)以延長(cháng)MEBOER色譜柱的使用(yòng)壽命
更新(xīn)時間:2018-11-08 點擊次數:2439次
MEBOER色譜柱的使用(yòng)壽命,除了與所分(fēn)析的樣品和流動相及使用(yòng)頻率有(yǒu)關系外,主要的是與日常的維護密切相關。MEBOER色譜柱的使用(yòng)壽命主要是柱效和柱壓兩個指标來衡量,如果一支MEBOER色譜柱柱效太低或柱壓太高,通常被認為(wèi)該MEBOER色譜柱已經結束。因此,延長(cháng)MEBOER色譜柱使用(yòng)壽命的關鍵是,消除引起柱效下降和柱壓升高的因素。以下是MEBOER色譜柱的日常維護方法:
一、流動相的PH應在使用(yòng)的範圍内
流動相超過其PH範圍将會導緻矽膠基質(zhì)流失和鍵合相碳鏈斷裂,使柱效下降,使用(yòng)壽命變短。由于流動相的PH控制不當而對MEBOER色譜柱造成的損害,通常很(hěn)難是MEBOER色譜柱恢複,因此必須認真對待,嚴格控制流動相的PH值。
二、去除樣品和流動相中(zhōng)的固體(tǐ)顆粒
樣品和流動相中(zhōng)含有(yǒu)的固體(tǐ)顆粒物(wù)質(zhì)會堵塞MEBOER色譜柱篩闆,篩闆被堵住不僅會引起柱壓的升高,而且也會引起柱效下降,因為(wèi)篩闆的堵塞會引起液流不均,導緻色譜峰型拖尾、變寬,從而使柱效下降。因此,建議使用(yòng)超純水和色譜純試劑,在分(fēn)析樣品前對樣品進行針筒過濾,流動相過0.45μm濾膜。
三、使用(yòng)保護柱或在線(xiàn)過濾器
樣品和流動相經過濾後并不能(néng)*消除固體(tǐ)顆粒物(wù)質(zhì),因為(wèi)泵的磨損、密封圈和管路的老化也會産(chǎn)生固體(tǐ)顆粒物(wù)質(zhì),這些固體(tǐ)顆粒被流動相帶入MEBOER色譜柱,堵塞篩闆,導緻柱壓升高、柱效下降。保護柱和在線(xiàn)過濾器上都有(yǒu)篩闆,其孔徑與MEBOER色譜柱孔徑相同,因此可(kě)以阻止固體(tǐ)顆粒物(wù)質(zhì)到達MEBOER色譜柱,有(yǒu)效防止MEBOER色譜柱篩闆的堵塞。由于柱壓升高在分(fēn)析故障中(zhōng)占很(hěn)大比例,因此,除對樣品和流動相進行過濾外,建議您在MEBOER色譜柱進樣端加上保護柱或在線(xiàn)過濾器。
如果MEBOER色譜柱柱壓升高是由于進樣端篩闆被堵引起的,可(kě)選擇以下方式進行補救:
1.先在MEBOER色譜柱前加上保護柱或在線(xiàn)過濾器,然後用(yòng)甲醇、水=20/80ml/min反向沖MEBOER色譜柱180min.
2.先在MEBOER色譜柱進樣端加上保護柱或在線(xiàn)過濾器,然後反向使用(yòng)。
四、正确使用(yòng)緩沖鹽
緩沖鹽通常易溶于水,難溶于有(yǒu)機溶劑,因此緩沖鹽使用(yòng)不當會使其析出,堵塞填料基質(zhì)上的微孔和顆粒間的空隙,使填料闆結,柱壓上升;同時阻礙了基質(zhì)上鍵合的碳鏈自由舒展,使MEBOER色譜柱的保留能(néng)力下降,柱效降低。緩沖鹽析出後,去除非常困難,因此,正确的使用(yòng)緩沖鹽對延長(cháng)MEBOER色譜柱使用(yòng)壽命非常重要。
正确使用(yòng)緩沖鹽的目的是防止緩沖鹽析出,因此正确使用(yòng)緩沖鹽的方法可(kě)歸結為(wèi)一句話:使用(yòng)前要過濾,使用(yòng)後要沖洗。具(jù)體(tǐ)方法如下:
1.等度條件:使用(yòng)緩沖鹽前和使用(yòng)後需用(yòng)過渡流動相以1.0ml/min流速沖洗60min;使用(yòng)後去除緩沖鹽的另一個方法是用(yòng)過渡流動相以0.2ml/min流速沖洗MEBOER色譜柱過夜。
2.梯度條件:用(yòng)含有(yǒu)緩沖鹽的流動相跑梯度之前,用(yòng)與初始流動相組成相同的過渡流動相以1.0ml/min流速沖洗60min,再用(yòng)該過渡流動相以1.0ml/min沖洗MEBOER色譜柱120min。含緩沖鹽流動相的梯度設定應盡量平緩,以避免梯度過程中(zhōng)緩沖鹽析出。
注意:過渡流動相是指有(yǒu)機相和水相的組成與分(fēn)析流動相相同,區(qū)别隻是過渡流動相不含緩沖鹽。
3.緩沖鹽析出的補救方法:
方案1:用(yòng)甲醇/20/80以1.0ml/min流速35攝氏度條件下反向沖洗MEBOER色譜柱120min
方案2:用(yòng)甲醇/水=20/80以0.2ml/min流速反向沖洗MEBOER色譜柱過夜。
五、防止強保留物(wù)質(zhì)在MEBOER色譜柱上存留
強保留物(wù)質(zhì)和大分(fēn)子化合物(wù)在MEBOER色譜柱中(zhōng)累積,對樣品中(zhōng)的化合物(wù)産(chǎn)生額外的保留行為(wèi),不僅引起峰型變寬、拖尾,使柱效下降,同時也會引起保留時間的變化,累積到一定程度時還會導緻柱壓升高。由于強保留物(wù)質(zhì)和大分(fēn)子化合物(wù)對色譜分(fēn)離的影響是一個累積效應,需要一定的時間才會體(tǐ)現出來,但對許多(duō)藥品特别是複雜樣品而言,很(hěn)難判斷其是否是含有(yǒu)強保留物(wù)質(zhì),因此要防止強保留物(wù)質(zhì)的累積,需要在每天的日常維護中(zhōng)用(yòng)純甲醇或乙氰清洗MEBOER色譜柱。
清洗方法:
1.未使用(yòng)緩沖鹽:每天分(fēn)析完成後,先用(yòng)上述方法除去緩沖鹽,然後再用(yòng)甲醇或乙氰反向沖洗MEBOER色譜柱60min。
2.使用(yòng)過緩沖鹽:分(fēn)析完成後,先用(yòng)上述方法除去緩沖鹽,然後在用(yòng)純甲醇或乙氰反向沖洗MEBOER色譜柱60min。
3.補救方法:
水--乙氰--lv仿(或異丙醇)--乙氰--水