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液相色譜柱的選擇方法

更新時間：2018-08-07   點擊次數：1695次
　在選擇色譜柱之前，先多了解自己的樣品和雜(zá)質，他們的類型結構、極性、酸堿性、分(fēn)子量大(dà)小(xiǎo)等等。樣品是極性的且弱酸性的;就可以選擇C18在100%酸性水溶液條件下(xià)檢測，即要選擇承受100%純水且對極性化合物(wù)保留很好的色譜柱。
特殊修飾的矽膠鍵合相可以穩定在pH1.5-10。
2.聚合物(wù)基質：應用pH值範圍寬，溫度穩定(高溫可以達到80度以上)，機械強度小(xiǎo)。
B顆粒外(wài)形
大(dà)多現代HPLC填料都是球形顆粒，但有時是不規則的顆粒。球形顆粒提供較低的柱壓、較高的柱效和穩定性以及較長的柱壽命在使用高粘度的活動相時;不規則顆粒有較大(dà)比表面積和相對低廉的價格。
C顆粒粒徑
粒徑越小(xiǎo)柱效越高、分(fēn)離(lí)度越高，但同時會導緻較高柱壓降。選擇1.5-3μm的填料以解決一(yī)些複雜(zá)樣品,UPLC可以使用1.5μm的填料;另外(wài)10μm或更大(dà)粒徑的填料用作半制備或制備柱。
D含碳量
含碳量指的是矽膠表面鍵合相的比例，與比表面積和鍵合覆蓋度等有關。高含碳量進步柱容量、分(fēn)辨率及分(fēn)析時間，用于要求高分(fēn)離(lí)度的複雜(zá)樣品;低含碳量分(fēn)析時間短、展現不同的選擇性，用于快速分(fēn)析簡單樣品及需要高含水活動相條件的樣品。一(yī)般C18的含碳量在7-19%不等。
E孔徑和比表面積
HPLC吸附介質是多孔的顆粒，盡大(dà)多數的反應表面于孔内。因此，分(fēn)子必須進進孔内才能被吸附和分(fēn)離(lí)。
孔徑和比表面積是相輔相成的兩個概念。孔徑小(xiǎo)比表面積大(dà)，反之亦然。比表面積大(dà)，增加樣品與鍵合相之間的反應，增加保存,上樣量和複雜(zá)成分(fēn)的分(fēn)離(lí)度;比表面積小(xiǎo)，平衡時間快，适合梯度分(fēn)析。
F孔容和機械強度
孔容，又(yòu)稱“孔體(tǐ)積”。指單位顆粒的空隙體(tǐ)積大(dà)小(xiǎo)。它能很好的反應填料的機械強度。孔體(tǐ)積大(dà)的填料相對孔體(tǐ)積小(xiǎo)的填料機械強度要略弱。孔體(tǐ)積爲1.5mL/g或更小(xiǎo)的填料大(dà)多用于HPLC分(fēn)離(lí)，而孔體(tǐ)積大(dà)于1.5mL/g的填料使用于尺寸排阻色譜和低壓色譜。
G封端封端
封端能夠降低極性堿性化合物(wù)由于與裸露的矽醇基相互作用而産生(shēng)的拖尾峰。不封端鍵合相相對封端鍵合相會産生(shēng)不同的選擇性，尤其是極性樣品。