新聞中(zhōng)心您現在的位置:首頁 > 新聞中(zhōng)心 > MEBOER色譜柱的保養是非常重要的

MEBOER色譜柱的保養是非常重要的

更新時間:2023-02-07   點擊次數:447次
  MEBOER色譜柱柱效高、分(fēn)離(lí)能力強、保留機理清楚,是液相色譜分(fēn)離(lí)模式中(zhōng)使用最爲廣泛的一(yī)種,對于生(shēng)物(wù)大(dà)分(fēn)子、蛋白(bái)質及酶的分(fēn)離(lí)分(fēn)析,反相液相色譜正受到熱烈歡迎。
  色譜柱使用一(yī)段時間後,常遇到柱子被污染,柱效會有一(yī)定程度的下(xià)降,采用适當的方法對色譜柱進行保護,可以延長色譜柱的使用壽命。
  樣品和流動相的處理:溶解的樣品進樣前用濾膜過濾,以除去(qù)不溶物(wù)。如果必要,需進行樣品的預處理。流動相中(zhōng)如有不純物(wù)質将影響柱效,所以溶劑盡量使用色譜的,少是分(fēn)析純,流動相使用前用微孔薄膜過濾。在流動相的輸液管前安裝過濾器。過濾器定期用甲醇超聲清洗,如果效果不好,可用10%的稀硝酸浸泡清洗。對于堵塞嚴重的過濾器,可在火(huǒ)焰上灼燒後再清洗。
  保護柱(預柱)的使用:對于較昂貴的色譜柱,可以在柱前加一(yī)保護柱,防止樣品中(zhōng)雜(zá)質污染分(fēn)析柱,對于制備柱,因其進樣量大(dà),使用保護柱尤爲重要。
  常規處理:矽膠、氧化鋁、極性鍵合相色譜柱每一(yī)次用完後用低流速長時間的二氯甲烷或正己烷等溶劑沖洗;鍵合相矽膠色譜柱、離(lí)子交換色譜柱和凝膠色譜柱先用蒸餾水沖洗,再用甲醇沖洗,然後用甲醇與蒸餾水以一(yī)定比例混合的溶液沖洗後過夜。
  MEBOER色譜柱對于已使用一(yī)段時間後柱效下(xià)降的色譜柱可按以下(xià)方法進行再生(shēng)。再生(shēng)處理包括活化(右→左)和淨化(左→右)兩種。矽膠、氧化鋁、極性鍵合相色譜柱按下(xià)列順序沖洗:基戊烷或己烷←→三氯乙烷←→乙酸乙脂←→丙酮←→乙醇←→水。鍵合相矽膠柱:蒸餾水←→甲醇(沖洗過程中(zhōng)可加入少量二甲基甲酰胺)。離(lí)子交換樹(shù)脂柱:高濃度的NaCl溶液(1-2molL的NaCl溶液)可使大(dà)部分(fēn)樹(shù)脂再生(shēng),油脂等少數與樹(shù)脂緊密結合的物(wù)質可用低濃度堿溶液(如0.1molL的NaOH溶液)沖洗,酸性有機物(wù)吸附在固定相的用低pH緩沖液沖洗,堿性有機物(wù)用高pH緩沖液沖洗,然後再用蒸餾水←→甲醇←→二氯甲烷←→甲醇←→蒸餾水沖洗。凝膠色譜柱:由于凝膠色譜柱是根據被分(fēn)離(lí)物(wù)質的分(fēn)子量大(dà)小(xiǎo)而分(fēn)離(lí)物(wù)質,通常用稀的氫氧化鈉或非離(lí)子型去(qù)垢劑(0.2%-1%NP-40或Lubrol)沖洗可除去(qù)大(dà)部分(fēn)的結合物(wù)質,如果一(yī)些污染物(wù)仍然不能清除時,用24%或30%乙腈沖洗過夜可除去(qù)疏水蛋白(bái),用30%-50%乙酸可除去(qù)親水蛋白(bái),用蛋白(bái)水解酶處理可分(fēn)解凝膠中(zhōng)剩餘的痕量胃蛋白(bái)酶,然後再用蒸餾水←→甲醇←→蒸餾水沖洗。
  已污染的色譜柱的處理:因保留強的物(wù)質污染,流動相或樣品中(zhōng)不溶物(wù)沉積于柱頭,可用下(xià)列方法洗滌:去(qù)除脂類可用四氫呋喃、乙腈或甲醇洗滌;去(qù)除蛋白(bái)質可用乙腈、丙醇和1%CCl3COOH進行梯度洗脫;一(yī)些高疏水性化合物(wù)可用乙腈或甲醇洗脫,同時反複注入100-200ml的四氫呋喃。
  柱頭處理:對于MEBOER色譜柱柱頭堵塞污染嚴重的情況而且用溶劑沖洗無效的色譜柱,隻有打開(kāi)柱子去(qù)除柱頂的填料重裝:先拆下(xià)不鏽鋼燒結過濾器,檢查柱床,常見凹陷或受污染的帶色填料,剔去(qù)不規則床層和帶色填料,使柱床顯白(bái)色并*水平,再用甲醇作糊狀填料勻漿液,将糊狀填料勻漿液滴在柱上靠重力從勻漿液中(zhōng)排出甲醇液,重複直到填料水平。