技術文章您現在的位置:首頁 > 技術文章 > Olis光譜儀 CPL圓偏振熒光光譜儀 圓二色光譜儀 應用領域分(fēn)析

Olis光譜儀 CPL圓偏振熒光光譜儀 圓二色光譜儀 應用領域分(fēn)析

更新時間:2022-05-10   點擊次數:1567次

美國Olis光譜儀 CPL圓偏振熒光光譜儀 CD圓二色光譜儀 應用領域分(fēn)析

 

蛋白(bái)質二級結構

在研究蛋白(bái)質折疊,蛋白(bái)質穩定性或酶活性時,蛋白(bái)質二級結構是重要的考慮因素。

用于監視二級結構的強大(dà)工(gōng)具是圓二色性(CD),它是左右圓偏振光的吸收差。由于蛋白(bái)質由手性氨基酸組成,因此它們具有CD活性,并顯示出對CD的二級結構敏感的*CD光譜。該光譜可以提供蛋白(bái)質結構的定性快照,或者可以使用多種算法從遠紫外(wài)CD光譜估算蛋白(bái)質的二級結構組成,其中(zhōng)一(yī)些算法可在Olis GlobalWorks軟件中(zhōng)獲得。

蛋白(bái)質二級結構也可用于監測蛋白(bái)質折疊和解折疊。平衡研究包括随溫度或化學變性劑增加而變化的CD光譜集合。随着蛋白(bái)質的展開(kāi),CD光譜反映了這一(yī)點。在此變性過程中(zhōng)以單個波長或全光譜掃描拟合數據可提供熱力學信息,例如熔融溫度和展開(kāi)焓。這兩個參數都提供了有關所研究蛋白(bái)質穩定性的重要信息。

在DSM 17, DSM 20,DSM 1000,和多掃描支持蛋白(bái)質二級結構研究。CD 250 Peltier電(diàn)池座等附件爲進行這些實驗提供了一(yī)種便捷的方法。

停止流

蛋白(bái)質折疊和展開(kāi)的動力學可以通過使用停止流附件進行監測。可以通過在停止流動反應過程中(zhōng)觀察信息波長的CD信号來研究蛋白(bái)質結構的毫秒變化。GlobalWorks還支持對這些動力學軌迹進行動力學分(fēn)析。

酶學

酶催化的機制對生(shēng)物(wù)化學領域的許多研究人員(yuán)而言很重要。酶活性測量的常用方法包括監測酶和底物(wù)溶液随時間變化的吸光度或熒光。随着反應的進行,吸光度或熒光的變化報告了産物(wù)濃度的增加。

穩态動力學

穩态動力學測量涉及在整個測量過程中(zhōng)監測酶/底物(wù)複合物(wù)在恒定濃度下(xià)表現出的吸光度或熒光變化。幾種Olis儀器支持穩态動力學的測量。這些包括諸如HPDA 8452,Cary 14,Cary 17, DW2,DW2000,DB620和RSM 1000的吸收模型,以及諸如DM 45和DM 245的熒光模型。

穩态前動力學

穩态前動力學涉及測量酶/底物(wù)複合物(wù)的形成。可以将停止流量附件添加到大(dà)多數此類儀器中(zhōng)。其他配件包括TLC 50,四格珀耳帖(Peltier)炮塔和自動酶測定儀。Olis CLARiTY室爲在高散射環境(例如全細胞或線粒體(tǐ)懸浮液中(zhōng))中(zhōng)測量酶動力學提供了令人興奮的新可能性。

DNA結構/構象

DNA的結構和構象是研究DNA與蛋白(bái)質和其他DNA配體(tǐ)相互作用的重要考慮因素。确定DNA結構和構象的技術包括X射線晶體(tǐ)學,圓二色性(CD),熒光和紫外(wài)可見吸收光譜。除X射線晶體(tǐ)學外(wài),所有這些技術均由Olis儀器提供支持。

圓二色性

DNA在200-250 nm區域表現出*的CD光譜,該光譜對DNA結構特别敏感。當添加擾動劑(例如溫度升高或DNA配體(tǐ))時,CD光譜可用于探測DNA結構。典型的實驗包括在溫度升高或将配體(tǐ)添加到樣品中(zhōng)的同時收集光譜。

所有Olis CD型号DSM 17,DSM 20,DSM 1000和Protein Machine都支持DNA的CD測量,并且包括諸如CD 250 Peltier溫控細胞架,用于配體(tǐ)結合的自動滴定儀和用于動力學研究的Stopped-Flow等附件。

熒光性

無論是直接來自DNA分(fēn)子還是來自外(wài)部探針,熒光都是闡明DNA結構信息的有價值的技術。發射最大(dà)值和熒光強度變化揭示了有關DNA結構完整性的信息。結合熒光探針在結合DNA後顯示出極大(dà)的熒光強度增強,并且也是有用的DNA結構探針。熒光能量轉移(FRET),其中(zhōng)兩個具有重疊發射和激發光譜的探針連接到同一(yī)DNA分(fēn)子。從供體(tǐ)染料轉移到受體(tǐ)染料的能量是兩者之間距離(lí)的函數。因此,FRET探針可以成爲監測适當标記的DNA分(fēn)子經曆的結構變化的有價值的工(gōng)具。所有Olis Fluorescence型号DM 45,DM 245,SLM 8000,SPF-500,RSM 1000F和Cary熒光系統的理想配置是支持DNA的熒光研究。DSM 17,DSM 20和DSM 1000也可以配置用于CD和熒光研究。

熒光各向異性

熒光各向異性是熒光探針遷移率的量度,也可用于觀察DNA結構和構象。在該技術中(zhōng),熒光探針被垂直偏振光激發,發射的偏振量與熒光壽命期間熒光探針的遷移率有關。快速移動的探針将*去(qù)極化(各向異性爲零),而較慢(màn)的探針(例如與DNA結合的探針)将保持部分(fēn)極化(非零各向異性)。Olis Polarization Toolbox附件爲任何Olis熒光計(SLM系列除外(wài))增加了各向異性功能。其他有用的附件包括TLC 50 Peltier池架,4池Peltier炮塔,自動滴定儀和Stopped-Flow。

紫外(wài)線吸收

DNA的紫外(wài)吸收光譜也揭示了有關DNA結構的重要信息。盡管由于結構差異而引起的變化通常很小(xiǎo),但是GlobalWorks中(zhōng)的Olis拟合算法甚至可以消除最小(xiǎo)的光譜變化。該RSM 1000, OLIS 14/17和HPDA 8452支持的紫外(wài)-可見吸收光譜的集合到探針DNA結構。有用的附件包括TLC 40珀耳帖電(diàn)池固定器和停止流。

線粒體(tǐ)代謝

光譜學的缺點之一(yī),特别是影響吸收率的是光散射對測量的影響。高度散射的樣品将增加市場上絕大(dà)多數分(fēn)光光度計的表觀吸收率。儀器無法區分(fēn)散射光和吸收光。實際上,該僞影通常用于通過測量600 nm的表觀吸光度來大(dà)緻定量細菌細胞培養物(wù)。

渾濁樣品

在1980年代,随着Aminco DW2和後來的DW2000的推出,部分(fēn)解決了這個問題。Olis仍然支持這些驚人的光學平台。但是,Olis現在通過CLARiTY系列儀器在該設計上居于**地位,該儀器具有在存在高散射介質的情況下(xià)記錄真實吸收光譜的能力。Olis CLARiTY系列儀器非常适合監測線粒體(tǐ)懸浮液,整個細胞或其他高度散射環境中(zhōng)的吸光度變化。

CLARiTY系列産品包括RSM 1000,DM 245和DB 620光學平台。RSM 1000配置允許收集快速掃描,通常配置爲每秒最多測量100次掃描。DM 245和DB 620配置爲随時間進行單個波長測量或用于常規吸光度掃描。CLARiTY室包括磁力攪拌和25至80 C temperature的溫度控制。常用附件包括TLC 50(用于RSM 1000),StepDisk(用于RSM 1000),Twin Peltier(用于DW2 / 2000)和熒光模塊(用于DW2 / 2000)。

化學動力學

反應動力學是實驗室和教室化學研究的重要組成部分(fēn)。動力學分(fēn)析的概念是許多本科化學課程的基礎,也是許多研究項目的基礎。Olis支持通過光譜學在紫外(wài)線,可見光或近紅外(wài)光譜區域内以微秒到小(xiǎo)時的時間範圍監視反應。動力學反應可以通過多種方法觸發,包括手動混合,停止流混合或快速光解。但是,可以由TTL信号啓動的任何觸發器都可以集成到Olis系統中(zhōng)。

吸光度和熒光

強大(dà)的Olis動力學系統是RSM 1000,可以輕松配置以用于從深紫外(wài)到近紅外(wài)的任何波長範圍。其獲得的ScanDisk技術支持每秒最多收集1000次光譜掃描。爲了以更适中(zhōng)的速率吸收光譜,HPDA 8452以高達10次掃描/秒的速度收集光譜掃描。RSM 1000,DB 620或HPDA 8452可用于單波長動态波長。

的DM 45,DM 245,RSM 1000F,和SLM系列熒光計提供的能力來監控熒光反應爲好。

停流,閃光燈,LED,Peltier TLC 45,Peltier TLC 50和電(diàn)磁攪拌器是這些測量的常用附件。